07-12
外泌體是一種從細(xì)胞中釋放出來的小囊泡彩匕，存在于各種哺乳動物的生物液體中汤善，如牛奶，除了乳制品應(yīng)用外吆视，它已被用于護膚多年捷枯。此外，外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的載體。
目的:在本研究中，我們旨在研究牛乳源性外泌體(MK-Exo)在人類皮膚抗衰老中的新作用柔滔。
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外泌體負(fù)載的SARS-CoV-2 RBD mRNA在小鼠的十二指腸內(nèi)傳遞誘導(dǎo)了中和抗體反應(yīng)
引起2019冠狀病毒病(COVID-19)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(SARS-CoV-2)給全球健康帶來了諸多挑戰(zhàn)溢陪。包括脂質(zhì)納米顆粒mRNA萍虽、滅活病毒和重組蛋白在內(nèi)的疫苗已被用于臨床預(yù)防SARS-CoV-2感染，并在控制大流行方面發(fā)揮了巨大作用形真。在這里杉编，我們提出并評估了一種基于牛乳源性外泌體(milk-exos)的口服mRNA疫苗超全，該疫苗編碼SARS-CoV-2受體結(jié)合域(RBD)作為免疫原。結(jié)果表明邓馒，乳源性外泌體傳遞的RBD mRNA可在體外293細(xì)胞中產(chǎn)生分泌的RBD肽嘶朱，并刺激小鼠抗RBD的中和抗體。這些結(jié)果表明光酣，用牛乳源性外泌體裝載SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗是一種簡單疏遏、廉價、新穎的在體內(nèi)引入針對SARS-CoV-2免疫的方法救军。此外财异，它還可以作為一種新的mRNA口服遞送系統(tǒng)。
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外泌體作為細(xì)胞間通訊載體參與了許多生物過程唱遭。由于外泌體作為細(xì)胞和基因治療以及藥物遞送應(yīng)用的天然載體被越來越多地探索戳寸，因此擁有高質(zhì)量的樣品至關(guān)重要。蛋白:顆粒比法拷泽、ELISA法疫鹊、western blotting法、聚合酶鏈反應(yīng)法和排粒徑高效液相色譜法是近年來廣泛應(yīng)用于外泌體純度分析的主要方法司致。然而拆吆，目前還沒有一種行之有效的方法可以方便地對外泌體樣品中的小尺寸雜質(zhì)進行常規(guī)質(zhì)量分析。本文采用尺寸排除高效液相色譜法(SE-HPLC)脂矫、離子交換高效液相色譜法(IEX-HPLC)和新型二維高效液相色譜法(2D-HPLC)對牛乳源性外泌體的純度進行了檢測锈拨，并對不同的外泌體分離工藝進行了詳細(xì)的研究。結(jié)果表明羹唠，2D-HPLC法能夠提高檢測外泌體純度的準(zhǔn)確性奕枢，具有較高的儀器精度和準(zhǔn)確性，減少了人員誤差和實驗成本佩微，大大縮短了分析時間缝彬，自動化程度更高。2D-HPLC方法快速哺眯、選擇性高谷浅、靈敏度好，適用于外泌體的藥物和毒理學(xué)分析奶卓。
07-12
基于外泌體相關(guān)基因的全基因組微擾分析篩選系統(tǒng)
據(jù)報道一疯，外泌體對體內(nèi)生理和病理狀態(tài)有重要影響。外泌體作為一種藥物傳遞載體已被廣泛研究夺姑，一些外泌體藥物已進入臨床研究階段墩邀。外泌體的產(chǎn)生、運輸和分泌機制仍有待深入研究盏浙。因此眉睹，在這里荔茬，我們開發(fā)了一種新的基于CRISPR uni的基因篩選系統(tǒng)，通過該系統(tǒng)竹海，我們可以在全基因組范圍內(nèi)揭示外泌體的生物發(fā)生慕蔚、運輸和攝取機制。該系統(tǒng)由兩部分組成:一部分是基因敲除組件;另一部分是一個獨特的分子標(biāo)識(UMI)標(biāo)記組件斋配，它可以標(biāo)記敲除細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體孔飒，其中每個sgRNA對應(yīng)一個特定的UMI。這樣艰争，通過檢測外泌體中裝載的UMI十偶，我們可以追蹤敲除基因。在本研究中园细，我們首先分別使用質(zhì)粒和慢病毒驗證了每個組分的功能惦积。接下來，我們使用單個慢病毒模擬慢病毒庫對細(xì)胞的感染猛频，以驗證篩選系統(tǒng)的功能狮崩。
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采用密度離心法純化牛乳外泌體，研究其對皮膚屏障的影響鹿寻。TEM睦柴、nanoFCM、Western-blot毡熏、LC-MS和BCA檢測表明坦敌，所獲得的牛乳外泌體為高純度的外泌體產(chǎn)物，其外觀痢法、粒度和標(biāo)記物符合牛乳外泌體的典型特征液狱窘。然后使用蛋白質(zhì)組學(xué)。結(jié)果表明财搁，牛奶外泌體有助于細(xì)胞間的粘附蘸炸，表明其具有皮膚屏障修復(fù)的作用。然后將HaCat細(xì)胞與牛乳外泌體孵育尖奔，細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)分析證實搭儒，在所有劑量下，牛乳外泌體都上調(diào)了緊密連接蛋白Claudin-1和Claudin-6提茁，下調(diào)了PPP2R1A和PPP2R2A等負(fù)調(diào)控因子淹禾。與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果相一致的分子分析表明，Claudin-1在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上均上調(diào)茴扁。然后用熒光染料標(biāo)記牛乳外泌體并局部涂于小鼠皮膚上铃岔。用熒光共聚焦顯微鏡觀察了標(biāo)記的牛乳外泌體的表皮痕跡。免疫組化檢測進一步證實丹弱，Claudin-1外用小鼠皮膚48小時后增強德撬。
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乳外泌體(MK-exo)對消費者的健康具有生物活性铲咨，是一種優(yōu)良的藥物傳遞載體躲胳。然而蜓洪，長期保存和運輸仍然是目前的主要挑戰(zhàn)。本報告大規(guī)模制備了高質(zhì)量的MK-exo坯苹。然后隆檀，我們開發(fā)了一種屬于MK-exo的凍干方法，并對凍干后的MK-exo進行了加速和長期穩(wěn)定性實驗粹湃，以評估凍干的效果恐仑。結(jié)果表明，MK-exo凍干后可在室溫下保存至少3個月为鳄，在2-8℃下保存15個月裳仆。這些發(fā)現(xiàn)為進一步了解MK-exo的性質(zhì)和應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持。