07-12
外泌體是一種從細(xì)胞中釋放出來的小囊泡沾乘，存在于各種哺乳動物的生物液體中，如牛奶诞丽，除了乳制品應(yīng)用外碉碉，它已被用于護(hù)膚多年啊鸭。此外，外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的載體。
目的:在本研究中媒怯，我們旨在研究牛乳源性外泌體(MK-Exo)在人類皮膚抗衰老中的新作用。
07-12
外泌體負(fù)載的SARS-CoV-2 RBD mRNA在小鼠的十二指腸內(nèi)傳遞誘導(dǎo)了中和抗體反應(yīng)
引起2019冠狀病毒病(COVID-19)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(SARS-CoV-2)給全球健康帶來了諸多挑戰(zhàn)髓窜。包括脂質(zhì)納米顆粒mRNA扇苞、滅活病毒和重組蛋白在內(nèi)的疫苗已被用于臨床預(yù)防SARS-CoV-2感染，并在控制大流行方面發(fā)揮了巨大作用寄纵。在這里鳖敷，我們提出并評估了一種基于牛乳源性外泌體(milk-exos)的口服mRNA疫苗，該疫苗編碼SARS-CoV-2受體結(jié)合域(RBD)作為免疫原程拭。結(jié)果表明定踱，乳源性外泌體傳遞的RBD mRNA可在體外293細(xì)胞中產(chǎn)生分泌的RBD肽，并刺激小鼠抗RBD的中和抗體恃鞋。這些結(jié)果表明屋吨，用牛乳源性外泌體裝載SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗是一種簡單、廉價(jià)山宾、新穎的在體內(nèi)引入針對SARS-CoV-2免疫的方法至扰。此外，它還可以作為一種新的mRNA口服遞送系統(tǒng)资锰。
07-12
外泌體作為細(xì)胞間通訊載體參與了許多生物過程敢课。由于外泌體作為細(xì)胞和基因治療以及藥物遞送應(yīng)用的天然載體被越來越多地探索，因此擁有高質(zhì)量的樣品至關(guān)重要绷杜。蛋白:顆粒比法直秆、ELISA法、western blotting法鞭盟、聚合酶鏈反應(yīng)法和排粒徑高效液相色譜法是近年來廣泛應(yīng)用于外泌體純度分析的主要方法圾结。然而，目前還沒有一種行之有效的方法可以方便地對外泌體樣品中的小尺寸雜質(zhì)進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量分析齿诉。本文采用尺寸排除高效液相色譜法(SE-HPLC)筝野、離子交換高效液相色譜法(IEX-HPLC)和新型二維高效液相色譜法(2D-HPLC)對牛乳源性外泌體的純度進(jìn)行了檢測晌姚，并對不同的外泌體分離工藝進(jìn)行了詳細(xì)的研究。結(jié)果表明歇竟，2D-HPLC法能夠提高檢測外泌體純度的準(zhǔn)確性挥唠，具有較高的儀器精度和準(zhǔn)確性，減少了人員誤差和實(shí)驗(yàn)成本焕议，大大縮短了分析時(shí)間宝磨，自動化程度更高。2D-HPLC方法快速盅安、選擇性高唤锉、靈敏度好，適用于外泌體的藥物和毒理學(xué)分析别瞭。
07-12
基于外泌體相關(guān)基因的全基因組微擾分析篩選系統(tǒng)
據(jù)報(bào)道窿祥，外泌體對體內(nèi)生理和病理狀態(tài)有重要影響。外泌體作為一種藥物傳遞載體已被廣泛研究畜隶，一些外泌體藥物已進(jìn)入臨床研究階段壁肋。外泌體的產(chǎn)生、運(yùn)輸和分泌機(jī)制仍有待深入研究籽慢。因此浸遗，在這里，我們開發(fā)了一種新的基于CRISPR uni的基因篩選系統(tǒng)箱亿，通過該系統(tǒng)跛锌，我們可以在全基因組范圍內(nèi)揭示外泌體的生物發(fā)生、運(yùn)輸和攝取機(jī)制届惋。該系統(tǒng)由兩部分組成:一部分是基因敲除組件;另一部分是一個(gè)獨(dú)特的分子標(biāo)識(UMI)標(biāo)記組件髓帽，它可以標(biāo)記敲除細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體，其中每個(gè)sgRNA對應(yīng)一個(gè)特定的UMI脑豹。這樣郑藏，通過檢測外泌體中裝載的UMI，我們可以追蹤敲除基因瘩欺。在本研究中必盖，我們首先分別使用質(zhì)粒和慢病毒驗(yàn)證了每個(gè)組分的功能。接下來俱饿，我們使用單個(gè)慢病毒模擬慢病毒庫對細(xì)胞的感染歌粥，以驗(yàn)證篩選系統(tǒng)的功能。
07-12
采用密度離心法純化牛乳外泌體拍埠，研究其對皮膚屏障的影響失驶。TEM、nanoFCM枣购、Western-blot嬉探、LC-MS和BCA檢測表明擦耀，所獲得的牛乳外泌體為高純度的外泌體產(chǎn)物，其外觀甲馋、粒度和標(biāo)記物符合牛乳外泌體的典型特征液埂奈。然后使用蛋白質(zhì)組學(xué)迄损。結(jié)果表明定躏，牛奶外泌體有助于細(xì)胞間的粘附，表明其具有皮膚屏障修復(fù)的作用芹敌。然后將HaCat細(xì)胞與牛乳外泌體孵育痊远，細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)分析證實(shí)，在所有劑量下氏捞，牛乳外泌體都上調(diào)了緊密連接蛋白Claudin-1和Claudin-6碧聪，下調(diào)了PPP2R1A和PPP2R2A等負(fù)調(diào)控因子。與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果相一致的分子分析表明液茎，Claudin-1在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上均上調(diào)逞姿。然后用熒光染料標(biāo)記牛乳外泌體并局部涂于小鼠皮膚上。用熒光共聚焦顯微鏡觀察了標(biāo)記的牛乳外泌體的表皮痕跡捆等。免疫組化檢測進(jìn)一步證實(shí)滞造，Claudin-1外用小鼠皮膚48小時(shí)后增強(qiáng)。
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07-12
乳外泌體(MK-exo)對消費(fèi)者的健康具有生物活性栋烤，是一種優(yōu)良的藥物傳遞載體谒养。然而，長期保存和運(yùn)輸仍然是目前的主要挑戰(zhàn)明郭。本報(bào)告大規(guī)模制備了高質(zhì)量的MK-exo买窟。然后，我們開發(fā)了一種屬于MK-exo的凍干方法薯定，并對凍干后的MK-exo進(jìn)行了加速和長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)始绍，以評估凍干的效果。結(jié)果表明话侄，MK-exo凍干后可在室溫下保存至少3個(gè)月亏推，在2-8℃下保存15個(gè)月。這些發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步了解MK-exo的性質(zhì)和應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持满葛。